为了开发ROS1融合肺癌患者的新治疗方法，研究人员研究了对克唑替尼(Xalkori)耐药的机制。分析表明，卡博替尼和吉非替尼的组合在体外和体内均显示出对克唑替尼耐药细胞系的有益作用。为了探索耐药机制，使用携带SLC34A2-ROS1融合基因的HCC78细胞作为细胞系耐药模型。克唑替尼在纳摩尔水平抑制HCC78细胞的增殖，并且抑制亲本HCC78细胞中ROS1蛋白或下游信号蛋白的磷酸化。通过连续暴露于克唑替尼4个月从HCC78细胞建立耐药细胞系，然后将其命名为HCC78R。
FISH分析表明，耐药细胞维持ROS1融合基因的程度与亲本HCC78细胞相同。HCC78R细胞中ROS1的RNA表达降低。与亲本HCC78细胞相比，HCC78R细胞中ROS1蛋白的表达也降低。接下来，评估了下一代ALK抑制剂（包括色瑞替尼，布加替尼，艾乐替尼和劳拉替尼）对体外细胞系的影响。除了艾乐替尼之外，所有抑制剂在纳摩尔水平都抑制了母体HCC78细胞的生长，而在HCC78R细胞中显示出的作用有限。ALK/EGFR抑制剂布加替尼在耐药细胞中表现出相对良好的抑制作用。
随后，使用RTK阵列全面评估了HCC78细胞和HCC78R细胞中受体酪氨酸激酶（RTK）的磷酸化。结果表明，与亲本HCC78细胞中的磷酸化相比，在克唑替尼暴露条件下，HCC78R细胞中EGFR磷酸化维持相对较好。与HCC78细胞相比，HCC78R细胞中ERBB2和MET磷酸化水平显著降低。与亲本HCC78细胞相比，HCC78R细胞中AXL的磷酸化增加。蛋白质印迹分析显示，在克唑替尼暴露下，HCC78R细胞中维持了EGFR和下游信号蛋白ERK1/2的磷酸化。总之，这些观察结果表明EGFR或AXL可能在HCC78R细胞的耐药机制中起作用。
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