在非小细胞肺癌（non–small cell lung cancer, NSCLC）中，EGFR突变患者一般对erlotinib、gefitinib等TKI抑制剂有效。但患者往往在治疗后的9~14个月出现耐药，其中EGFR T790M突变是最常见的耐药机制，超过50%的组织活检中能够确认该突变的存在。AZD9291是第三代的EGFR TKI抑制剂，具有高选择性、不可逆的特点。AURA研究显示AZD9291可以逆转EGFR T790M突变引起的第一代EGFR-TKI耐药，尤其是二次活检携带T790M突变的晚期NSCLC患者。

　　2015年5月份Nature Medicine发表了由阿斯利康和Dana-Farber癌症研究中心联合完成的工作，揭示了AZD9291的一种耐药机理。本期介绍该项研究，上两期提及的Geoffrey R. Oxnard医生也参与其中。

　　耐药突变的发现：血液cfDNA NGS分析

　　样品：AURA研究中的7名NSCLC患者给药前和疾病进展后成对的血浆样本。

　　NGS分析：血浆中提取得到cfDNA,利用Illumina HiSeq对20个基因进行外显子测序。

　　AZD9291耐药突变：其中一名33岁女性患者（subject 1），接受化疗和EGFR TKIs治疗后出现PD.耐药后的组织检测为EGFR T790M突变阳性。AZD9291用药6周后部分缓解，23周后出现系统进展。系统进展后的血浆cfDNA测序发现EGFR 20号外显子上出现新的C797S突变（T→A）。此外，NGS证实用药前血浆cfDNA中即存在EGFR T790M突变和exon19缺失。

　　EGFR C797S耐药位点的验证

　　小鼠细胞系的构建：分别构建含有和不含EGFR C797S突变的小鼠Ba/F3细胞系，两种细胞系都稳定表达EGFR敏感突变（exon 19缺失或L858R）和耐药突变EGFR T790M.

　　细胞生长的评估。含有EGFR C797S突变的细胞系对AZD9291和CO-1686不敏感。

　　EGFR蛋白的磷酸化。不含有EGFR C797S突变的细胞系在AZD9291和CO-1686存在的情况下，EGFR蛋白的磷酸化作用被显著抑制。而含有EGFR C797S突变的细胞系则不受影响。具体结果见上图c.

　　可见EGFR C797S有可能是一个AZD9291的耐药位点。

　　对NGS结果的ddPCR验证

　　对上述这名33女性患者（subject 1）利用ddPCR进行动态的血液检测。在接受AZD9291治疗前，该患者的血液中具有高浓度的EGFR敏感突变（exon 19缺失）和EGFR T790M突变。

　　在接受AZD9291治疗的6周后，EGFR敏感突变（exon 19缺失）和EGFR T790M突变的含量较治疗前下降约100倍。同时患者出现部分缓解。

　　在治疗的第12~23周，伴随疾病进展，EGFR敏感突变（exon 19缺失）和EGFR T790M突变含量重新上升。同时出现了EGFR C797S突变。如有需要，请咨询康必行海外医疗医学顾问：4006-130-650.

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