PD-1为T细胞上的免疫检查点。当PD-1与其配体PD-L1结合时，T细胞则将PD-L1阳性的细胞识别为正常细胞，从而将PD-L1阳性细胞放行。 因此当一些癌细胞大量表达PD-L1时，会被T细胞误以为是正常细胞，从而逃脱了免疫杀伤。表达PD-L1的肿瘤无法被T细胞杀伤，导致患癌小鼠存活率急剧下降。Wendell A. Lim课题组首先使用往T细胞中转染Cas9核糖核蛋白复合体的方法进行PD-1敲除，在此基础上制备获得靶向CD19的CAR-T细胞。将PD-1缺失的靶向CD19 CAR-T细胞注射入CD19+、PD-L1+肿瘤小鼠体内，小鼠体内肿瘤能够被有效清除。除此以外，国内也有学者通过敲除LAG-3的方法制备出治疗Raji淋巴瘤更高效的CAR-T细胞。
以上案例，都使用了CRISPR/Cas9技术对T细胞进行高效的基因编辑，从而制备得到增强型CAR-T细胞，并且都选择了Lonza电穿孔的方法来做细胞转染。肿瘤免疫细胞治疗研究在临床转化过程中存在的最大的问题即安全问题。CAR-T诱发细胞因子释放综合症（CRS），随后产生的一系列毒副作用已经引起人们的关注。除此之外，CAR-T细胞的生产制备过程也存在各种生物安全隐患。
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